尝试通过发酵的途径来生产有实用价值的微生物多糖已有很长的历史,这当中被广泛研究的多糖包括:用Leuconostoc mesenteroides生产的葡聚糖,用Pseudomonas sp.生产的细菌海藻酸盐, , 用Xanthamonas compestris生产的黄原胶 , 用Streptococcus faecalis生产的热凝胶,用Aureobasidium pullulans生产的普鲁兰糖,以及用Strptococcus equii 生产的透明质酸和Rhizobium生产的琥珀聚糖等。 尽管目前能获得商业化生产的多糖只占在所研究过的多糖中极少部份,但这一少部份多糖因其极好的性能而能在工业上被广泛使用。也正由于黄原胶等多糖的开发取得了巨大的成功,鼓舞人们期望找到更多的有商业前景的微生物多糖。
1 结冷胶生产菌种
为了寻找理想的食品胶,Kelco公司在世界各地采集土壤或植物样本对30,000多株菌种进行了筛选,结冷胶的产生菌正是在这种不懈努力下获得的,原来称为Pseudomonas elodea,后来基于r-RNA特征及含有鞘氨醇糖脂被进一步确认为Sphingomonas paucimobilis,这是种带有黄色色素、G¯的好氧杆状菌[26]。从生物技术的角度来看,Sphingomonas这一属中的菌株的共同特征是能分泌出如结冷胶、沃仑胶、鼠李胶这样的一类多糖。
这些菌株能从多种环境中分离得到,不过Sphingomonas paucimobilis中的多数菌株是从临床样本或医院周边环境中分离到的。工业上最早采用的结冷胶生产菌株为Pseudomonas elodea,它是从一种水百合上分离而得。
2 结冷胶的生物合成途径微生物胞外多糖的生物合成可以分为同型多糖的合成与异型多糖的合成,结冷胶的合成属于后者。异型多糖的合成体系包含5个因子,即糖基核苷酸、酰基供体、脂中间体、酶系统及糖基受体。Ligio等提出了Pseudomonas eLAdea合成结冷胶重复四糖单元的可能途径。作为活性前体提供的糖基核苷酸被认为是UDP-葡萄糖、TDP-鼠李糖和UDP-葡萄糖醛酸,它们共同成为合成重复单位的单体供体。涉及前体合成的酶有磷酸葡萄糖异构酶(PG1)、磷酸葡萄糖变位酶(PGM)、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UGP)、TDP-葡萄糖焦磷酸化酶(TGP)、UDP-葡萄糖脱氢酶(UGD)和TDP-鼠李糖合成酶(TRS)。Pseudomonas elodea对葡萄糖的代谢主要经由糖酵解途径和磷酸戊糖途径。
3 结冷胶的生产技术
它是在含有碳源、有机和无机氮源、磷酸盐适量微量元素的介质中,通过通风发酵进行生产。发酵在消毒的条件下严格控制通气量、搅拌、温度和pH,发酵完成后,用巴斯德灭菌法杀死发酵液中的活菌体,然后利用溶剂回收产品。
3.1 培养基
A:种子培养基:蔗糖 20克 蛋白胨 5克 牛肉膏 3克 酵母浸出汁 1克 pH7.0
B:发酵培养基:蔗糖 豆粉 蛋白胨 磷酸二氢钾等
3.2 工艺流程
工艺过程如下图所示。

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